一、实验准备

1. 实验动物：选取6 - 8周龄、体重18 - 22g的健康C57BL/6小鼠30只，雌雄各半。小鼠购入后先在温度（23±2）℃、相对湿度（50±10）%、12h光照/12h黑暗的环境中适应性饲养7天，自由摄食和饮水。

2. 实验试剂与材料：30%过氧化氢溶液、无水乙醇、橄榄油、电子天平、1mL注射器、微量移液器、游标卡尺、手术剪、镊子、一次性无菌棉签、数码相机、4%多聚甲醛溶液。将30%过氧化氢溶液用无水乙醇和橄榄油按体积比1:1:2稀释成10%过氧化氢工作液，现用现配。

二、实验步骤

1. 小鼠背部脱毛：使用电子天平对小鼠逐只称重并记录。用手术剪小心地将小鼠背部脊柱两侧约2 cm×2 cm范围内的毛发剪去，操作时注意避免剪伤皮肤。然后用镊子夹取蘸有无水乙醇的棉签，轻柔擦拭脱毛区域，进一步清理毛发并消毒皮肤。

2. 过氧化氢溶液涂抹：用微量移液器吸取50 μL配制好的10%过氧化氢工作液，均匀涂抹在小鼠背部脱毛区域，每天早晚各涂抹1次，连续涂抹21天。涂抹过程中确保溶液覆盖整个脱毛区域，且避免小鼠舔舐。

3. 观察与记录：从涂抹过氧化氢溶液第7天起，每天观察小鼠背部皮肤颜色变化，并用数码相机拍照记录。每3天使用游标卡尺测量白斑的最长径（a）和与之垂直的最长径（b），根据公式S=πab/4计算白斑面积，记录数据。

三、模型鉴定

1. 皮肤组织取材：在涂抹过氧化氢溶液第21天，实验结束后，将小鼠用颈椎脱臼法处死。迅速用手术剪剪取小鼠背部白斑部位及周围正常皮肤组织，大小约0.5 cm×0.5 cm。

2. 组织固定：将取下的皮肤组织立即放入4%多聚甲醛溶液中固定，固定时间为24 - 48小时。固定完成后，进行后续的组织切片、染色等检测步骤，如苏木精 - 伊红（HE）染色观察皮肤组织结构，多巴染色观察黑色素细胞数量及活性，以确定模型是否构建成功。若皮肤组织中黑色素细胞数量减少、形态异常，多巴染色阳性反应减弱，则表明过氧化氢诱导的小鼠白癜风模型构建成功。

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